Вірусологічні методи дослідження в мікробіології

Опубликованно 06.11.2018 05:10

У медицині розроблені спеціальні методи дослідження для діагностики захворювань з вірусною природою. Це необхідно, щоб ідентифікувати вірус, вивчити його біологію і здатність впливати на клітини тварини і людини. Таким чином, з\'являється можливість зрозуміти патогенез вірусних захворювань і, відповідно, правильно вибрати методику лікування. У чому полягає діагностика?

Віруси розмножуються в живих клітинах. Щоб його дослідити, необхідно культивування на рівні піддослідного організму або культури клітин. Для цього в медичній практиці і мікробіології в цілому проводяться вірусологічні методи дослідження, які мають такі основні підходи: прямий; непрямий; серологічний.

Матеріал можуть досліджувати безпосередньо на наявність нуклеїнових кислот, вірусного антигену або, наприклад, ізолювати і ідентифікувати вірус з клінічного матеріалу.

Крім можливості встановити етіологію захворювання, моніторингу терапевтичного ефекту, вірусологічні методи дослідження відіграють велику роль у протиепідемічних заходах. Для виділення і культивування вірусу використовують курячі ембріони, лабораторних тварин або культури клітин. Як досліджують?

Найшвидший – це прямий метод. Він дозволяє виявити вірус, антиген або ПК (нуклеїнову кислоту) в самому клінічному матеріалі. Займає час від двох годин до доби. ЕМ – електронна мікроскопія. Виявляє безпосередньо вірус. ІЕМ – імунна електронна мікроскопія. Використовує специфічні антитіла до вірусів. РИФ – реакція імунофлюоресценції. Використовує антитіла, пов\'язані з барвником. Такі вірусологічні методи дослідження широко застосовуються в якості швидкої розшифровки етіології ГРВІ (гострих респіраторних вірусних інфекцій), коли беруть мазки-відбитки зі слизової оболонки верхніх дихальних шляхів. ІФА – імуноферментний аналіз - визначення вірусних антигенів, схоже на РИФ, але засноване на мечении антитіл ферментами. РИА – радиоиммунный аналіз. Використовує мітку антитіл радіоізотопами для забезпечення високої чутливості визначення вірусного антигену. Молекулярний – гібридизація ПК або виділення геномів вірусу за допомогою ПЛР (полімеразної ланцюгової реакції). Цитологія – застосовується рідко, але при певних інфекціях ці вірусологічні методи дослідження дуже ефективні. Досліджуються матеріали біопсії, аутопсії і мазки, що обробляються з метою фарбування та аналізу під мікроскопом. У чому сенс досліджень?

Для успішного виділення вірусів клінічний матеріал беруть у відповідності з патогенезом і як можна раніше. Часто цей процес вимагає проведення декількох пасажів, перш ніж застосувати певні вірусологічні методи дослідження.

Мікробіологія вивчає мікроскопічні істоти. І її область – це не тільки медицина. Вона є основоположною наукою для сільського господарства, ветеринарії, космічної та технічної промисловості, геології.

Але безумовно все створено для людини і його розвитку на цій прекрасній планеті. Тому дуже важливо вчасно виявити небезпеку і нейтралізувати її. Віруси відрізняються від бактерій. Це структури, що потрапляють в організм і викликають утворення нового покоління. Вони схожі на кристали і спрямовані на управління процесом свого розмноження, хоча самі не харчуються, не ростуть і не виділяють продуктів обміну.

Вірус здатний викликати важке захворювання у будь-якого живого організму, у який він потрапив. До того ж він може еволюціонувати. Саме тому вірусологічні методи дослідження в мікробіології повинні розвиватися і вдосконалюватися, так як під загрозою може бути людська цивілізація в цілому. Матеріали

Для виявлення та ідентифікації вірусів в медицині, як правило, беруться: носоглотковий змив (респіраторні інфекції); змив і фекалії (ентеровірусні інфекції); зіскрібки, вміст пухирців (ураження шкіри, слизових оболонок, як герпес, вітряна віспа); змиви (экзантемные інфекції, як кір, краснуха); кров, спинномозкова рідина (арбовірусні інфекції). Фази

Всі етапи вірусологічного методу дослідження включають в себе: забір матеріалу; вибір, отримання тест-системи, визначення її життєздатності; зараження тест-системи; індикація вірусу; визначення типу вірусу.

В основному, патогенні віруси відрізняються наявністю тканинної і типової специфічності. Взяти, приміром, поліовірус, який репродукується тільки у приматів (в клітинах). Відповідно, для виділення певного вірусу використовують певну культуру тканини. Якщо мова йде про невідомому збуднику, то доцільно буде одномоментно заразити три, а краще чотири культури клітин.

Таким чином, можливо, одна з них виявиться чутливою. Щоб визначити наявність вірусу в інфікованих культурах, дивляться на розвиток специфічної дегенерації клітин, внутрішньоклітинні включення, виявлення специфічного антигену, позитивні реакції гемаглютинації і гемадсорбции.

Всі вірусологічні методи дослідження (прямі і непрямі, серологічні) повинні бути вибрані, як найбільш підходящі для конкретного випадку ймовірного інфікування.

Непрямі методи ґрунтуються на виділенні та ідентифікації вірусу. Вони трудомісткі, тривалі, але точні. Серодиагностика

Під діагностикою розуміється метод, заснований на реакції антиген-антитіло. Найчастіше використовують парні сироватки крові, взяті з інтервалом у кілька тижнів. Якщо наростання титру антитіл в 4 і більше разів, реакцію вважають за позитивну. Щоб визначити типоспецифичность вірусу, застосовують реакцію вируснейтрализации. Для визначення группоспецифичности потрібно отримати реакцію зв\'язування комплементу.

Широко використовують різні варіанти імуноферментного аналізу, реакції гальмування гемаглютинації, пасивної гемаглютинації, зворотного пасивної гемаглютинації, РИФ. Ще в генній інженерії був розроблений метод отримання моноклональних антитіл. Подолати вузьку специфічність моноклонов можна застосуванням декількох моноклональних антитіл до різних вірусних детермінанти. Таким чином, була підвищена специфічність і чутливість дослідження з визначенням антигенів. Деякі особливості

Сьогодні створено багато різних тест-систем для імунологічної діагностики інфекцій, що виникли внаслідок потрапляння вірусу в живий організм.

Таким чином, вірусологічні методи дослідження – це способи виділення вірусів, вивчення їх властивостей та встановлення їх етіологічного зв\'язку з певними захворюваннями.

Що стосується тварин, що використовуються в цих дослідженнях, то вони повинні бути досить сприйнятливі до певної вірусної інфекції, вони не повинні бути носіями латентної інфекції та якихось паразитів. Значення також має вид тваринного, його вік, порода, вага тіла, вгодованість, статева приналежність і умови утримання. У досвіді беруть участь тварини одного виду, віку, з однаковими умовами утримання. Іноді можуть бути використані різні види тварин, з різною чутливістю до одного і того ж вірусу. Це допомагає виявити різноманітність інфекційних форм. Автор: Ізмайлова Лілія 13 Жовтня, 2018

Категория: Новости